Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Конечную точку титрования допускается обнаруживать визуально по изменению окраски титруемой жидкости от желтой до красновато-коричневой при условии обеспечения необходимой точности.
2.5.13. АЛЮМИНИЙ В АДСОРБИРОВАННЫХ ВАКЦИНАХ
Испытуемое вещество гомогенизируют и переносят соответствующее количество, содержащее от 5 мг до 6 мг алюминия, в колбу для сжигания вместимостью 50 мл. Прибавляют 1 мл серной кислоты Р, 0,1 мл азотной кислоты Р и несколько стеклянных шариков. Нагревают полученный раствор до его помутнения из-за выделяющегося белого дыма. Если на данной стадии наблюдается обугливание, прибавляют несколько капель азотной кислоты Р и продолжают кипячение до исчезновение окраски. Смесь охлаждают несколько минут, с осторожностью добавляют 10 мл воды Р и кипятят до получения прозрачного раствора. Охлаждают, прибавляют 0,05 мл метилового оранжевого раствор Р и нейтрализуют натрия гидроксида раствором концентрированным Р (6,5 мл на 7 мл). Если образуется осадок, его растворяют, добавляя по каплям достаточный объем серной кислоты разведенной Р. Переносят раствор в
коническую колбу вместимостью 250 мл, остатки в колбе для сжигания смывают 25 мл воды Р. Прибавляют 25,0 мл 0,02 М раствора натрия эдетата, 10 мл ацетатного буферного раствора рН 4,4 Р, несколько стеклянных шариков и осторожно кипятят в течение 3 мин, добавляют 0,1 мл пиридилазонафтола раствор Р и титруют горячий раствор 0,02 М раствором меди сульфата до изменения цвета раствора на пурпурно-коричневый.
Испытания повторяют без использования вакцины.
1 мл 0,02 М раствора натрия эдетата соответствует 0,5396 мг Al.
2.5.14. КАЛЬЦИЙ В АДСОРБИРОВАННЫХ ВАКЦИНАХ
Все растворы, используемые для данного исследования должны готовится с использованием воды Р .
Кальций определяют атомно-эмиссионной спектрометрией (2.2.22, метод 1). Исследуемое лекарственное средство гомогенизируют. К 1,0 мл прибавляют 0,2 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р и разводят до 3,0 мл водой Р. Измеряют интенсивность излучения при длине волны 620 нм.
2.5.15. ФЕНОЛ В ИММУНОСЫВОРОТКАХ И ВАКЦИНАХ
Исследуемое лекарственное средство гомогенизируют. Разводят до необходимого объема водой Р, чтобы получить раствор, содержащий 15 мкг/мл фенола. Готовят ряд стандартных растворов с фенолом Р, содержащих 5 мкг, 10 мкг, 15 мкг, 20 мкг и 30 мкг/мл фенола соответственно. К 5 мл исследуемого раствора и к 5 мл каждого стандартного раствора прибавляют 5 мл буферного раствора рН 9,0 Р, 5 мл раствора 1 г/л аминопиразолона Р и 5 мл раствора 50г/л калия ферроцианида Р. Дают отстояться 10 мин и измеряют интенсивность окрашивания при длине волны 546 нм.
Строят градуировочный график и рассчитывают содержание фенола в лекарственном средстве.
2.5.16. БЕЛОК В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Используют мерную колбу необходимого объема для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида. Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема водой Р. Помещают 1 мл раствора в стеклянную пробирку и добавляют 0,15 мл раствора 400 г/л кислоты трихлоруксусной Р. Встряхивают, дают отстояться 15 мин, центрифугируют в течение 10 мин при скорости вращения 5000 об/мин и удаляют надосадочную жидкость. К полученному осадку добавляют 0,4 мл 0,1 M раствора натрия гидроксида Р.
Стандартные растворы. Разводят 0,100 г альбумина бычьего Р в 100 мл 0,1 M натрия гидроксида (основной раствор, содержащий 1 г/л белка). Разводят 1 мл основного раствора до 20 мл 0,1 M раствором натрия гидроксида Р (рабочий раствор 1 с концентрацией белка 50 мг/л). Разводят 1 мл основного раствора до 4 мл 0,1 M раствором натрия гидроксида Р (рабочий раствор 2 с концентрацией протеина 250 мг/л). В 6 стеклянных пробирок помещают 0,10 мл, 0,20 мл и 0,40 мл рабочего раствора 1 и 0,15 мл, 0,20 мл и 0.25 мл рабочего раствора 2. доводят объем в каждой пробирке до 0,40 мл, используя 0,1 M раствор натрия гидроксида Р.
Готовят контрольный раствор, используя 0,40 мл 0,1 M раствор натрия гидроксида Р
В каждую пробирку добавляют 2 мл раствора медно-тартратногоо Р встряхивают и дают отстояться в течение 10 мин. В каждую пробирку добавляют по 0,2 мл смеси равных объемов фосфомолибденовольфрамового реактива Р и воды Р, приготовленной непосредственно перед использованием. Закрывают пробирки, перемешивают, переворачивают их и дают отстояться в темном месте в течение 30 мин. Голубой цвет остается стабильным в течение 60 мин. При необходимости центрифугируют для получения прозрачных растворов.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 760 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Строят градуировочный график на основе оптической плотности 6 стандартных растворов и соответствующей концентрации белка и сравнивают с графиком показателей белка в исследуемом растворе.
2.5.17. НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до необходимого объема водой Р. При необходимости разводят исследуемый раствор до достижения оптической плотности, подходящей к используемому прибору. Измеряют оптическую плотность (2.2.25) при длине волны 260 нм, используя воду Р в качестве раствора сравнения.
